Estandarización del análisis multi-locus de número variable de repeticiones en tándem automatizado para tipificación de Staphylococcus aureus Resistentes a Meticilina causantes de infecciones invasivas en población pediátrica paraguaya / Standardization of automated multi-locus variable number tandem repeats analysis for Methicillin-resistant Staphylococcus aureus typing isolated from invasive infections in paraguayan pediatric population

Introducción: Staphylococcus aureus es considerado uno de los patógenos humanos más importantes a nivel mundial y sus niveles de resistencia a meticilina han aumentado incluso en cepas aisladas de personas sin factores de riesgo nosocomial, por lo que la tipificación genética de los clones circulantes es fundamental para comprender los patrones de diseminación. Objetivo: Obtener la tipificación de SARM que causaron infecciones invasivas a niños mediante el empleo de la técnica de análisis multi-locus de número variable de repeticiones en tándem (MLVA) automatizada. Materiales y Métodos: Estudio observacional, descriptivo de corte transverso. Resultados: Se analizaron 25 cepas SARM que representan más de 700 aislamientos de S. aureus colectados en los años 2010, 2012 y 2013 de 4 hospitales de referencia nacional. La automatización de la técnica MLVA incluyó la tipificación del 88% (22/25) de los aislamientos en estudio, resultando 3 perfiles diferentes, cada uno asociado a un "spa tipo" distinto, siendo el perfil 1-t019 el predominante (86%), seguido por el perfil 3-t002 (9%), arrojando 100% de concordancia con el método MLVA manual, así como una alta concordancia con el método estándar de oro, PFGE. Conclusiones: La inclusión de un método de análisis de fragmentos automatizado permitió llevar a cabo la caracterización de aislamientos mejorando el tiempo de respuesta y manteniendo una alta sensibilidad en comparación con el método manual.

Introduction: Staphylococcus aureusis considered one of the most critical human pathogens worldwide, and its levels of methicillin resistance have increased even in strains isolated from people without nosocomial risk factors. Therefore the genetic typing of circulating clones is essential to understand dissemination patterns. Objective: Obtain the MRSA typing that caused invasive infections in children by using the automated multi-locus variable number of tandem repeats (MLVA) analysis technique. Materials and methods: Observational, descriptive, cross-sectional. Results: 25 strains MRSA representing more than 700S. aureusisolates collected in 2010, 2012, and 2013 from 4 national reference hospitals were analyzed. The MLVA automation included the typing of 88% (22/25) isolates, resulting in 3 different profiles, each one associated with a different spa type, being the 1-t019 the predominant (86%), followed by the 3-t002 profile (9%), yielding 100% concordance with the MLVA manual, as well as high concordance with the standard gold method, PFGE. Conclusions: The inclusion of an automated fragment analysis method led to the characterization of isolates, improving response time, and maintaining high sensitivity compared to the manual process.

Caracterización molecular de aislamientos de Escherichia coli productores de toxina Shiga obtenidos en 2 establecimientos ganaderos del Paraguay Caracterización molecular de aislamientos de STEC de ganado bovino paraguayo / Molecular characterization of Shiga toxin producing Escherichia coli isolated from 2 livestock establishments of Paraguay

Resumen Escherichia coli productora de toxina Shiga (STEC) es un patógeno de importancia alimentaria en los humanos, el bovino es su principal reservorio. El objetivo de este estudio fue determinar la portación de STEC en bovinos del Paraguay y analizar el perfil de virulencia y los serotipos de los aislados reunidos. Se estudiaron 197 muestras de hisopado rectal de bovinos y un promedio de 5 a 50 colonias por bovino positivo a genes stx 1 /stx 2. Se amplificaron por PCR los genes stx 1, stx 2, saa, ehxA y eae. El 84,8% de los bovinos resultaron portadores de STEC. Los perfiles de virulencia predominantes fueron stx 2 y stx 2 /saa/ehxA. La serotipificación se realizó por reacciones de aglutinación en 60 aislamientos seleccionados, se encontró un aislamiento del serogrupo O103, capaz de producir infecciones en humanos. Este trabajo muestra los primeros datos de portación de STEC de ganado bovino paraguayo y señala la necesidad de efectuar otros estudios con mayor cobertura territorial, para lograr una visión completa de este fenómeno.

Abstract Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) is a food-borne pathogen in humans, with cattle being the main reservoir. The objective of this study was to determine the carrying of STEC in Paraguayan bovines and to analyze the virulence profile and serotypes of these isolates. A total of 197 samples of bovine fecal samples and an average of 5 to 50 colonies from stx 1 /stx 2 positive samples were studied. The stx 1 , stx 2 , saa, ehxA and eae genes were amplified by PCR. 84.8% of the cattle were carriers of STEC. The predominant virulence profiles were stx 2 and stx 2 /saa/ehxA. The serotyping was performed by agglutination reactions for 60 selected isolates, resulting in isolation of serogroup O103, which could produce infections in humans. This work shows the first data of STEC carriers in Paraguayan cattle, and indicates the need for other studies with greater territorial coverage for a complete vision of this phenomenon.

Estandarización de una técnica de PCR múltiple para la detección de los serogrupos O157, O104 y "big six" de Escherichia coli productora de la toxina Shiga (STEC) / Standardization of a multiplex PCR technique for the detection of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) serogroups O157, O104 and "big six"

Los serogrupos O26, O45, O103, O104, O111, O121, O145 y O157 de STEC se relacionan con un elevado número de casos de SUH a nivel mundial, por lo que están incluidos dentro de las categorías de mayor riesgo para los humanos, según los criterios de autoridades alimentarias de Estados Unidos y Europa. El método convencional de identificación de antígenos O y H se realiza por aglutinación con antisueros de conejo. Este método además de ser muy costoso y laborioso, no se encuentra disponible en el país para empleo masivo. En este contexto, el objetivo de este estudio observacional descriptivo de corte transverso ha sido la estandarización de una técnica de PCR múltiple para la detección de estos 8 serogrupos, a fin de contar con un sistema de detección eficiente, sensible y con potencial de aplicación en la industria alimentaria. Se estandarizaron reacciones de PCR empleando como controles positivos cepas E. coli de referencia correspondientes a la totalidad de los serogrupos citados. Se obtuvieron productos de tamaños esperados para cada serogrupo, no se observaron amplificaciones cruzadas o falsos positivos. Esta técnica estandarizada podría representar una herramienta rápida y menos costosa que la técnica serológica, con la capacidad de ser aplicada a diferentes matrices, permitiendo la detección de estos serogrupos en aislados STEC de ganado en pie, fuentes de agua de consumo, alimentos e incluso en aislamientos clínicos asociados a enfermedades humanas(AU)

STEC serogroups O26, O45, O103, O104, O111, O121, O145, and O157, are related to a high number of cases of HUS worldwide, so they are included in the categories of greatest risk for humans, according to the food administration criteria of the United States and Europe. The conventional method of identifying antigens O and H is carried out by agglutination with rabbit antisera. This method is very expensive and laborious and is not available in the country for massive-scale use. In this context, the objective of this cross-sectional descriptive observational study has been the standardization of a multiplex PCR technique for the detection of these 8 serogroups, in order to have an efficient and sensitive detection system with the potential for application in the food industry. PCR reactions were standardized using as positive controls reference E. coli strains to correspond to all the mentioned serogroups. Products of expected sizes were obtained for each serogroup; no cross-amplification or false positives were observed. This standardized technique could represent a quick and less expensive tool than the serological technique, with the possibility to be applied to different kind of samples, allowing the detection of these serogroups in STEC isolates of live cattle, sources of drinking water, food and even in clinical isolates associated with human diseases(AU)

Resistencia inducible a clindamicina en Staphylococcus aureus resistentes a meticilina aislados de pacientes pediátricos en Paraguay / Inducible resistance to clindamycin in methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolated from Paraguayan children

Resumen Introducción: El método de difusión de doble disco se presenta como una alternativa diagnóstica que permite identificar aislados de Staphylococcus aureus susceptibles a clindamicina, ante el aumento de resistencia a meticilina, reduciendo así la posibilidad de fallo en el tratamiento. Objetivo: Determinar la frecuencia de resistencia a clindamicina inducida por eritromicina en S. aureus resistentes a meticilina (SARM) aislados de niños paraguayos. Materiales y Métodos: Estudio observacional, descriptivo, de corte transversal. Se colectaron 145 aislados S. aureus que causaron infecciones de piel y tejidos blandos y osteo-articulares en pacientes pediátricos del Hospital Central del Instituto de Previsión Social en el período de diciembre-2012 a noviembre-2013. La resistencia a clindamicina se determinó por métodos automatizados y de difusión de doble disco. Se realizó reacción de polimerasa en cadena para genes ermA, ermB, ermC y msrA de aislados representativos. Resultados: La resistencia global a meticilina y clindamicina fue de 67 y 13%, respectivamente (11% atribuible al mecanismo de resistencia a clindamicina inducible). Los genes ermC y msrA fueron detectados individualmente en 25 y 17% de los aislados, respectivamente, mientras que un aislado presentó ambos genes en simultáneo. Discusión: La frecuencia de mecanismo de resistencia inducible a clindamicina señala la importancia de los métodos de difusión de doble disco en la práctica microbiológica, así como se encuentran en los límites de puntos de cortes considerados como aceptables para el uso de este antimicrobiano para infecciones cutáneas y osteo-articulares causadas por SARM.

Background: The double disc diffusion method is an alternative diagnostic that allows the identification of Staphylococcus aureus isolates apparently susceptible to clindamycin but that may develop resistance due to an induction phenomena, mainly asociated to the increase in resistance to methicillin, thus increasing the possibility of failure in the treatment. Aim: To determine the frequency of induced clindamycin resistance in methicillin-resistant S. aureus (MRSA) isolated from Paraguayan children. Materials and Methods: In this cross sectional study, we collected 145 S. aureus isolates that caused skin and soft tissue and osteoarticular infections in pediatric patients of the Central Hospital I.P.S. in the period from December-2012 to November-2013. Resistance to clindamycin was determined by automated methods and double disc diffusion. PCR was performed for ermA, ermB, ermC and msrA genes from representative isolates. Results: The global resistance to methicillin and clindamycin was 67 and 13%, respectively (11% attributable to the inducible mechanism). The ermC and msrA genes were detected individually in 25 and 17% of the isolates respectively while an isolate presented both genes simultaneously. Discussion: The frequency of inducible resistance to clindamycin indicates the importance of double disc diffusion methods in microbiological practice, as well as being within the cut off points considered acceptable for the use of this antibiotic for skin infections. and osteoarticular caused by MRSA.

Portación de fimH en aislados de Escherichia coli productor de Toxina Shiga provenientes de ganado bovino, Departamento Cordillera, Paraguay / Portability of fimH in isolates of Shiga toxin-producing Escherichia coli from cattle, Department of Cordillera, Paraguay

Ciertas cepas de Escherichia coli productoras de toxina Shiga (STEC) tienen la capacidad de formar biofilm en alimentos y otras superficies, aumentando su potencial como fuente de contaminación. El gen fimH se ha asociado a la capacidad de formación de biofilm en E.coli. Este estudio observacional descriptivo de corte transverso se realizó con el objetivo de describir la portación de fimH en aislados STEC provenientes de muestras de materia fecal de ganado bovino del Departamento de Cordillera en el 2016. Los aislados de STEC se obtuvieron por cultivos, extracción de ADN y amplificación por PCR de genes stx1 y stx2. El gen fimH se detectó por PCR convencional. Un total de 1006 aislamientos de E. coli se sometieron a extracción de ADN y amplificación por PCR para genes stx1 y stx2. De éstos, 269 se identificaron como STEC, en los que la detección del gen fimH se realizó por PCR convencional. Un producto de PCR representativo se sometió a secuenciación del gen fimH y mostró 100% de homología con secuencias de la Base de Datos de GenBank. De 269 aislamientos STEC, 129 aislamientos (48%) resultaron ser portadores del gen fimH y por tanto con potencial de formar biofilm. Esta frecuencia elevada representa un riesgo de persistencia de estos patógenos en elementos y superficies de trabajo de sitios de expendio y manipulación de productos cárnicos. Este trabajo contribuye como una herramienta esencial para seguir con la línea de investigación, obteniendo datos de suma importancia que ayuden a describir la situación de riesgo de contaminación alimentaria en que se encuentra el país(AU)

Evaluación de la capacidad formadora de biofilm de cepas de S. aureus resistentes a meticilina que infectaron a niños paraguayos

Introducción: La capacidad de S. aureus para adherirse a superficies y a otras células bacterianas, para conformar un biofilm, es una de las principales causas de la persistencia de las infecciones por este patógeno. Objetivo: Analizar la capacidad de formación de biofilm, mediante el ensayo in vitro en placa de poliestireno, de cepas de S. aureus. Material y métodos: Estudio descriptivo de corte trasverso Se estudiaron 10 cepas resistentes a meticilina, con caracterización molecular de factores de virulencia y representativas de los grupos clonales detectados en un total de 347 cepas que causaron infecciones de piel y partes blandas e invasivas en niños en el 2012. La estandarización del ensayo in vitro fue exitosa, permitiendo clasificar a las cepas en 3 categorías según la intensidad de formación del biofilm. Resultados: El 100% de las cepas analizadas fue formadora de biofilm y se identificó dentro de la categoría de formadores moderados. Conclusiones: La detección de la formación de biofilms bacterianos, sobre todo en infecciones crónicas, es un tema crucial, ya que de ello depende la elección de estrategias especiales para su eliminación, como la remoción quirúrgica, dada la inefectividad de las terapias antibióticas tradicionales.

Introduction: The capacity of S. aureus to adhere to surfaces and other bacterial cells by forming a biofilm is one of the main causes of the persistence of infections by this pathogen. Objective: To analyze the capacity of S. aureus strains to form biofilm, using in vitro polystyrene plate culture techniques. Materials and methods: This was a descriptive, cross-sectional study. We studied and performed molecular characterization of viruence factors in ten strains of S. aureus, which were representative of the clonal groups detected in a total of 347 strains that caused skin and soft tissue invasive infections in children in 2012. The standardization of the in vitro assay was successful, allowing to classify the strains into 3 categories according to the intensity of biofilm formation. Results: 100% of the analyzed strains were biofilm formers and were categorized as moderate formers. Conclusions: The detection of the formation of bacterial biofilms, especially in chronic infections, is crucial, since it affects the choice of special strategies, such as surgical removal, for their elimination, given the ineffectiveness of traditional antibiotic therapies.

Staphylococcus aureus adquiridos en la comunidad: caracterización clínica, fenotípica y genotípica de aislados en niños paraguayos / Community-acquired Staphylococcus aureus isolated from Paraguayan children: clinical, phenotypic and genotypic characterization

Introduction: The prevalence of Staphylococcus aureus in the community has increased, being the pediatric population the most affected. This fact highlights the need for epidemiological surveillance. Aim: To characterize clinical, phenotypic and genotypic isolates of S. aureus children’s samples with community-acquired infections, collected in hospitals of Asuncion and the Central Department, between November 2009 and December 2010. Materials and Methods: Descriptive and transverse analysis with analytical component. Clinical data collected by medical records, antibiotic susceptibility according to CLSI criteria and detection of mecA (encoding methicillin resistance) and luk-PV genes (encoding Panton Valentine leucocidin) by PCR using specific oligonucleotides. Results: 123 isolates of S. aureus, 76% came from skin and soft tissue infections and 20% from sepsis. 18.7% (n = 23) were resistant to methicillin (MRSA). The presence of the mecA gene, a variant there and the PVL was detected in 12.2 and 48 isolates respectively. 43% of MRSA (n = 10) was carrying luk-PV. The clinical and demographic differences between patients infected with MRSA or MSSA were not statistically significant. Discussion: This study constitutes the first phenotypic and genotypic characterization of S. aureus associated with pediatric patients in Paraguay.

Introducción: La prevalencia de infecciones por Staphylococcus aureus en la comunidad ha aumentado, siendo la población pediátrica la más afectada; poniendo de relieve la necesidad de una vigilancia epidemiológica. Objetivo: Caracterizar clínica, fenotípica y genotípicamente aislados de S. aureus de muestras de niños con infecciones adquiridas en la comunidad, recolectadas en hospitales de Asunción y el Departamento Central, entre noviembre de 2009 y diciembre de 2010. Materiales y Métodos: Estudio descriptivo de corte trasverso. Datos clínicos fueron recabados de fichas, la susceptibilidad a antimicrobianos se hizo según criterio del CLSI y la detección de genes mecA y luk-PV se realizó por RPC empleando oligonucleótidos específicos. Resultados: De 123 aislados de S. aureus, 76% provenían de infecciones de piel y tejidos blandos y 20% de pacientes con bacteriemias. 18,7% (n: 23) fueron resistentes a meticilina (SARM). Se detectó la presencia de genes mecA, una variante del mismo y luk-PV en 9,8%, 1,6 y 39% de los aislados, respectivamente. El 43% de los SARM (n: 10) fue portador de luk-PV. Las diferencias clínicas y demográficas entre pacientes infectados por SARM o SASM no fueron estadísticamente significativas. Discusión: Este estudio constituye la primera caracterización clínica, fenotípica y genotípica de S. aureus asociados a la comunidad en población pediátrica realizada en Paraguay.

Frecuencia de staphylococcus aureus meticilino resistente y del factor de virulencia PVL en pacientes ambulatorios con infección de piel y partes blandas de Asunción, Paraguay / Frequency of methicillin-resistant staphylococcus aureusand PVL virulence factor in ambulatory patients with skinand soft tissue infections of Asuncion, Paraguay

Staphylococcus aureus (S. aureus) es actualmente el agente etiológico más frecuente en infecciones de piel y tejidos blandos. El S. aureus meticilino resistente (SAMR) aislado en infecciones de pacientes de la comunidad ha ido aumentando, constituyéndose en un problema de salud pública a nivel mundial. En Paraguay existen pocos registros sobre la meticilino resistencia y factores de virulencia a nivel comunitario, por lo que se realizó este estudio observacional descriptivo para determinar la frecuencia de SAMR y del factor de virulencia leucocidina de Panton Valentine (PVL-Panton Valentine leukocidin), así como el perfil de resistencia antimicrobiana acompañante a la meticilino resistencia en S. aureus aisladosde infecciones de piel y partes blandas de pacientes ambulatorios de dos laboratorios de Asunción, Paraguay, entre octubre de 2012 a febrero de 2014. La identificación bacteriana se realizó mediante técnicas microbiológicas convencionales y la susceptibilidad antimicrobiana por la prueba de difusión en disco. Elgen mecA y luk-PV fueron detectados por la técnica de PCR. De los 70 aislados de S. aureus estudiados, el 54,3% (38/70) fue SAMR tanto por método fenotípico como molecular. La frecuenciade PVL fue de 15,7% (11/70), siendo mayor en los SAMR (21%; 8/38) que en los SAMS (9,4%; 3/32). El 2,6% de los SAMR presentó resistencia a ciprofloxacina, no se observó multiresistencia en ningún aislado. Se encontró alta frecuencia de SAMR comparado con reportes previos en Paraguay. Se requiere fortalecer estrategias de vigilancia, prevención y control de la resistencia bacteriana en ambientes hospitalarios y de la comunidad.

Staphylococcus aureus (S. aureus) is currently the most common etiologic agentof skin and soft tissue infections. The isolation of methicillin-resistant S. aureus(MRSA) from infections of patients in the community has increased, becoming a public health problem worldwide. In Paraguay, there are few records aboutmethicillin resistance and virulence factors at community level. Therefore, this descriptive observational study was performed to determine the frequency of MRSA and factor virulence of Panton-Valentine leukocidin (PVL) as well as the antimicrobial resistance profile accompanying methicillin resistance in S. aureusisolated from skin and soft tissue infections in ambulatory patients from two laboratories of Asuncion, Paraguay from October, 2012 to February, 2014. The bacterial identification was performed using conventional microbiological techniques and the antimicrobial susceptibility was determined by disk diffusion. The mecA andluk-PV genes were detected by PCR technique. Out of the 70 S. aureus isolates studied, 54.3% (38/70) was SAMR by phenotypic and molecular methods. PVL frequency was 15.7% (11/70) being higher in MRSA (21%; 8/38) than in the SAMS (9.4%; 3/32), 2.6% of the MRSA was resistant to ciprofloxacin and multidrug resistance was not observed in any isolates. A high frequency of MRSA was found compared with previous reports in Paraguay. It is required to strengthen surveillance, prevention and control of bacterial resistance strategies in hospital and community environments.

Enterobacterias productoras de betalactamasas de espectro extendido aisladas de pacientes ambulatorios y hospitalizados en un laboratorio privado de Asunción / Extended spectrum β lactamases producing Enterobacteriaceae isolated from outpatient and hospitalized patients in a private laboratory in Asunción, Paraguay

Entre los mecanismos de resistencia en Enterobacteriaceae, las ß-lactamasas de espectro extendido (BLEE) juegan un papel de gran importancia. Estas enzimas confieren resistencia a penicilinas, cefalosporinas de primera, segunda y tercera generación y al aztreonam y por su naturaleza plasmídica se diseminan con mucha facilidad. El presente estudio observacional, descriptivo de corte trasverso tuvo como objetivo determinar la frecuencia de enterobacterias productoras de BLEE en pacientes ambulatorios e internados del Laboratorio San Roque de septiembre a noviembre de 2012. La identificación bacteriana fue realizada por métodos convencionales y la determinación de BLEE por dos métodos fenotípicos; sinergismo de doble disco y el de disco combinado. De los 481 aislados, 88,1% era proveniente de pacientes ambulatorios y 11,9% de internados; resultó predominante Escherichia coli, seguido por Klebsiella pneumoniae. Fue confirmada la producción de BLEE por ambos métodos en 47 enterobacterias, 9,8%. Entre estas K. pneumoniae produjo BLEE con mayor frecuencia 30,8%, seguida de E coli, 6,6%. Todas las cepas productoras de BLEE aisladas en este estudio presentaron actividad cefotaximasa. La frecuencia obtenida es menor a lo reportado en países vecinos, lo que podría deberse a que la mayoría de los aislamientos provinieron de pacientes ambulatorios. Coincidente con estudios realizados en Latinoamérica, K. pneumoniae fue la productora de BLEE con mayor frecuencia y la acción de las BLEEs fue preferentemente sobre las cefotaximas. Si bien la cifra de BLEE encontrada no es alta, se debe insistir en tomar medidas para lograr la reducción de la frecuencia, considerando las graves implicancias que tiene la presencia de esta enzima.

Among resistance mechanisms of enterobacteriaceae, the production of ExtendedSpectrum Betalactamases (ESBL) plays an important role. These enzimes are capable ofinactivating, apart from penicillins, first and second generation cephalosporins, oxyiminocephalosporinsand aztreonam, and because of their plasmidic nature, they spread easily.We conducted a cross-sectional descriptive observational study. The objective was todetermine the frequency of ESBL producing enterobacteriaceae in outpatient andhospitalized patients at the San Roque laboratory from September to November 2012. Microbiological ESBL detection was performed by the double-disk synergy and combineddisk tests. Among 481 clinical isolates of Enterobacteriaceae, 88.1% was from outpatientsand 11.9% from hospitalized patients. Escherichia coli was predominant, followed byKlebsiella pneumoniae. ESBL production was confirmed by both methods in 47enterobacteriaceae, 9.8%. Among these, the most frequent producer of ESBL was K.pneumoniae 30.8% followed by E. coli, 6.6%. All ESBL-producing enterobacteriacea in thisstudy presented cefotaximase activity. The frequency obtained is lower than rates reportedin neighboring countries, which could be explained by the fact that most of the isolates werefrom outpatients. Like other studies in Latin America, ESBL- producing K. pneumoniae wasmore frequent and the action of ESBLs was mainly on cefotaximase. While the number ofESBL found is not high, we should insist on taking steps towards reducing the frequency,considering the serious implications of the presence of this enzyme.

Detección molecular de belactamasas de espectro extendido (BLEE) en enterobacterias aisladas en Asunción / Molecular detection of extended spectrum beta-lactamase (esbl) in enterobacteria isolated in Asunción

Las betalactamasas de espectro extendido (BLEE), son enzimas responsables de la hidrólisis del anillo betalactámico de penicilinas y cefalosporinas, excepto carbapemenes, inhibiendo así su actividad terapéutica. Si bien es posible la detección fenotípica de este mecanismo de resistencia por métodos convencionales, sólo los métodos moleculares permiten la identificación del gen responsable de dicha resistencia. El objetivo de este estudio descriptivo retrospectivo fue identificar los genes blaCTX-M2, blaPER-2, blaSHV y blaTEM, en aislamientos de enterobacterias productoras de BLEE,; de muestras clínicas colectadas entre julio 2007 y abril 2008, provenientes de dos hospitales de referencia de Asunción, Paraguay. La detección molecular de los genes se realizó por reacción en cadena de la polimerasa empleando oligonucleótidos específicos. De los 232 aislados BLEE analizados, el 83% (n=192) portó al menos un gen bla, en el 17% (n=40) restante no fue detectado ninguno de los genes incluido en el estudio. Se observaron las siguientes frecuencias: 49% (94/192) blaCTX-M2, 45% (86/192) blaSHV, 40% (77/192) blaTEM y 7% (13/192) blaPER-2. En el 47% (90/192) se detectó más de un gen, siendo la combinación blaCTX-M2+blaTEM+blaSHV, la más frecuente observada en 32 aislados. El blaCTX-M2 como el gen más frecuente en este estudio; concuerda con lo reportado en nuestro país y en Argentina. Este es el primer reporte de la presencia de blaTEM y blaSHV en Paraguay. Es de gran importancia el estudio de otros genes codificantes de resistencia, considerando la emergencia de otras BLEE en la región como blaCTX-M15 con actividad predominantemente ceftazidimasa.

Extended spectrum beta-lactamases (ESBLs), are enzymes responsible for thehydrolysis of the beta-lactam ring and resistance to both cephalosporins and penicillins,except carbapenems, therefore inhibiting its therapeutics activity. Even though, detectionof the phenotypic resistance mechanism by conventional methods is possible, onlymolecular methods allow identification of the gene responsible for the resistance. Theobjective of this retrospective study was to identify the blaCTX-M2, blaPER-2, blaSHV, blaTEMgenes in ESBL-producing enterobacteriaceae isolates, recovered from clinical samples collected between July 2007 and April 2008, from two reference hospitals in Asunción,Paraguay. Molecular gene detection was performed by polymerase chain reaction usingspecifics oligonucleotides. Out of the tested 232 ESBL-producing isolates, 83% (n=192)carried at least one of the bla genes as follows; 49% (94/192) blaCTX-M2, 45% (86/192)blaSHV, 40% (77/192) blaTEM and 7% (13/192) blaPER-2. In the rest 17% (n=40) none of thegenes included in this study was detected; in 47% (90/192) more than one gene wasdetected, resulting blaCTX-M2 + blaTEM + blaSHV as the most frequent combination in 32isolates. The presence of blaCTX-M2, as the most frequent codifying genes of BLEE is inagreement with previous reports in Paraguay and Argentina. This is the first report of thepresence of blaTEM and blaSHV circulating in Paraguay. It is of much importance the study ofothers codifying resistance genes, taking into account the emergence of other BLEE in theregion, such as blaCTX-M15, predominantly with ceftazidimase activity.

Portación de Staphylococcus aureus multiresistentes a antimicrobianos en cavidad bucal de niños que concurren para un tratamiento en una clínica odontológica, Paraguay / Carriage of Multidrug-resistant Staphylococcus aureus in the Oral Cavities of Children Presenting for Treatment at a Dental Clinic in Paraguay

Introducción: Staphylococcus aureus es un microorganismo que posee características particulares de virulencia y resistencia a los antibióticos para uso clínico cuya diseminación es de gran importancia en salud pública. Objetivo: Identificar S. aureus sensibles y resistentes a antimicrobianos, colonizantes en cavidad bucal de niños que concurrieron para un tratamiento a una Clínica Odontológica en Asunción. Materiales y Métodos: En este estudio descriptivo, observacional realizado de agosto a septiembre de 2013, se incluyeron niños de 2 a 15 años de edad. Hisopados de cavidad bucal fueron colectados y cultivados en agar-manitol-sal. Los aislados de S. aureus fueron caracterizados respecto a la susceptibilidad a 11 antibióticos y por métodos moleculares se buscó la presencia del gen mecA y del factor de virulencia pvl. Se empleó un cuestionario sobre datos socio-demográficos y factores de riesgo asociados a infección con S. aureus. Resultados: Se incluyeron 112 niños. Se aisló S. aureus en 37 (33%) hisopados y 35 (94,6%) aislados presentaban resistencia a al menos un antibiótico. Resultaron resistentes a: Penicilina (89%), Cloranfenicol (16,2%), Oxacilina (10,8%), Eritromicina (8%), Clindamicina (8%), Gentamicina (5,4%) y un aislado con resistencia intermedia a Ciprofloxacina (2,7%). Cuatro aislados de S. aureus presentaban resistencia a múltiples drogas, los mismos portaban el gen mecA. No se detectó portación del factor de virulencia PVL. Conclusión: La elevada portación en cavidad oral de S. aureus multiresistentes en niños sin factores de riesgo como hospitalización previa o consumo de antibióticos, implica un alto riesgo para posibles infecciones endógenas, además del potencial de transferencia de determinantes de resistencia entre gérmenes de flora bucal normal .

Introduction: Staphylococcus aureus isa bacterium with special characteristicsof virulence and resistance to theantibiotics used in clinical practice, andwhose spread presents a significantpublic health challenge...

Consulta prenatal: motivos de inasistencia, ¿se justifica? / Prenatal care: non attendance causes, is it justified?

Conocer qué factores personales (epidemiológicos, socioeconómicos), institucionales y médicos están relacionados con la inasistencia a la consulta prenatal. Departamento de Obstetricia y Ginecología, Hospital "Dr. Adolfo Prince Lara", Puerto Cabello, Estado Carabobo. Estudio descriptivo epidemiológico, analítico de corte transversal, basado en una entrevista-encuesta, en 1000 pacientes que en el embarazo actual o pasado no se controlaron durante el año 2008. En factores epidemiológicos, predominó residencia en barrios (57,2 por ciento), educación secundaria (59,7 por ciento), estado civil soltera (48,1 por ciento) y la edad entre 20-29 años (40,4 por ciento). Con los factores sociales, dominó el domicilio lejano (52,3 por ciento), en los económicos, el desempleo (27,3 por ciento) y en la educación prenatal, el desconocimiento de la importancia del control (48,8 por ciento). En los factores institucionales fue determinante el ambiente inadecuado de la consulta (39,2 por ciento) y la ubicación lejana del centro de salud (19,3 por ciento). En factores de atención médica refirieron, consulta de baja calidad (29,8 por ciento), seguida de la opinión de pocas horas de consulta (23,2 por ciento). La falta a la consulta prenatal está relacionada con múltiples factores, esto conlleva a la instauración de actividades educativas, incluye desarrollar acciones efectivas para elevar la calidad de vida, rescate de programas preventivos de salud, además de reparación y dotación de las instalaciones de salud; sin olvidar mejoras del acto médico

To know what personal (epidemiological, socioeconomic), institutional and medical factors are related to non attendance to prenatal care. Department of Obstetrics and Gynecology, Hospital "Dr. Adolfo Prince Lara", Puerto Cabello, Estado Carabobo. Descriptive, epidemiological, analytical, transversal study, based in a interview-survey, in 1000 patients with no prenatal care in the actual or previous pregnancy during 2008. In epidemiological factors, prevailed suburb residency (57.2 percent), high school education (59.7 percent), marital status single (48.1 percent), and age between 20-29 years (40.4 percent). In social factors, predominated distant residence (52.3 percent), in the economical, unemployment (27.3 percent) and in prenatal education, ignorance of the importance of the prenatal care (48.8 percent). In the institutional factors was determinant unappropriated environment (39.2 percent) and distant location of the health center (19.3 percent). In the medical attention factors, reported low quality of the consultation (29.8 percent), followed by few hours of attendance (23.2 percent). The lack of prenatal care is related to multiple factors, that suggest the instauration of educative activities to elevate the life quality, rescue of the health preventive programs, and repairing and equip of health infrastructure; without forget the improvement of the medical act

Estado neonatal en prematurez: 2005-2007 / Neonatal state in prematurity: 2005-2007

Estudiar el parto pretérmino, el estado neonatal y su morbi-mortalidad perinatal. Estudio descriptivo, retrospectivo, epidemiológico y analítico de 199 gestantes y 224 prematuros sucedidos durante el período de 2005-2007. Hubo 6 988 nacidos vivos en el lapso, lo que significa incidencia de 3,2 por ciento. Departamento de Obstetricia y Ginecología, Hospital “Dr. Adolfo Prince Lara”, Puerto Cabello, Estado Carabobo. La patología de ingreso predominante fue el trabajo de parto pretérmino 41,20 por ciento (82/199), amenaza de parto pretérmino 26,13 por ciento (52/199), la rotura prematura de membrana 15,07 por ciento (30/199) e hipertensión inducida por el embarazo (7,53 por ciento) (15/199). El 56,28 por ciento fueron multigestas (112/119) 66,84 por ciento (133/199) con edad de embarazo entre 28 y 36 semanas, y 71,36 por ciento (142/199) tuvieron parto vaginal. Los neonatos fueron masculinos en 54,46 por ciento (122/224), de peso entre 1500 y 2499 g 52,67 por ciento (118/ 224) y talla neonatal 40-44 cm 33,03 por ciento (74/224); hubo índice de Apgar 6 o menos el 84,05 por ciento (137/163). La morbilidad global fue 41,07 por ciento (92/224) y mortalidad neonatal 12,95 por ciento (29/224), en esto fue determinante el síndrome de dificultad respiratoria y la sepsis. La prematurez presenta elevada incidencia de morbimortalidad neonatal, sus causas principales son las deficiencias respiratorias y la sepsis. Esto indica que debemos continuar estudiando sus factores etiogénicos y prestar una atención materno-neonatal de elevada calidad.

Aborto séptico en el Hospital Dr. Adolfo Prince Lara 1977-2006 / Septic abortion at the Dr. Adolfo Prince Lara Hopsital 1977-2006

Determinar la incidencia del aborto séptico, características maternas y factores relacionados. Estudio retrospectivo, descriptivo y analítico de 9 529 abortos sucedidos durante 1997-2006, de los cuales 168 fueron sépticos. Hubo un aborto séptico por cada 57 abortos. Hospital "Dr. Adolfo Prince Lara", Puerto Cabello. El aborto séptico tuvo una incidencia 1,76 por ciento con rangos de 0,67 por ciento (1997) y 2,87 por ciento (2003), hay tendencia a cifras mayores en los últimos 5 años. Pacientes residentes urbanas eran 89 (52,98 por ciento), solteras 107 (63,70 por ciento), de 24 años y menos 94 (55,96 por ciento), con gestaciones entre II-V 118 (70,24 por ciento), edad de embarazo menor de 10 semanas 102 (60,72 por ciento), 8 pacientes (4,76 por ciento) tenían antecedente de ingesta de misoprostol. El diagnóstico fue fundamentalmente por clínica, ecografía y laboratorio en 106 casos (63,1 por ciento); grado séptico I (91,07 por ciento), tratadas con antibióticos y curetaje la mayoría 159 (94,64 por ciento), permanecieron hospitalizadas de dos o tres días el 58,93 por ciento, la mayor morbilidad fue anemia en un 71,16 por ciento. La mortalidad materna fue de 2,38 por ciento o una cada 42 abortos sépticos. El aborto séptico mostró una incidencia baja con una alta morbimortalidad, se asoció a factores socioconómicos. En consecuencia, deben incrementarse los programas preventivos de salud sexual y reproductiva y apoyo familiar.

To determine the incidence of septic abortion, maternal characteristics and related factors. Retrospective, descriptive and analytic study of 9 529 abortions happened during 1997-2006, from which 168 were septic. There was one septic abortion each 57 abortions. Hospital Dr. Adolfo Prince Lara, Puerto Cabello, Estado Carabobo. The septic abortion had an incidence of 1.76 percent with ranks of 0.67 percent (1997) and 2.87 percent (2003), with tendency to higher numbers in 5 last years. Were urban residents 89 patients (52.98 percent), unmarried 107 (63.70 percent), of 24 years and less 94 (55.96 percent), with gestations between II-V 118 (70.24 percent), age of pregnancy lower than 10 weeks 102 (60.72 percent), and history of misoprostol ingestion 8 patients (4.76 percent). Basicly the diagnostic was by clinical, ultrasound and laboratory in 106 cases (63.1 percent), septic abortion degree I 153 (91.07 percent), treatment with antibiotics and curettage 159 (94.64 percent), remaining hospitalized from 2 or 3 days 99 (58.93 percent), the greater morbidity was anemia 133 (71.16 percent). Maternal mortality 2.38 percent (4/168) or each for 42 septic abortions. The septic abortion showed a low incidence with an important morbid-mortality, is associated to social-economic factors. Consequently, the preventive programs of sexual and reproductive health and familiar support must be increased.

Prematurez: resultados perinatales / Prematurity: perinatal result

Estudiar el parto prematuro, sus condiciones obstetricas, describir el estado neonatal y su morbimortalidad. Departamento de Obstetricia y Ginecología, Hospital "Dr. Adolfo Prince Lara", Puerto Cabello, Estado Carabobo. Estudio descriptivo retrospectivo epidemiológico analítico de 412 prematuros sucedidos durante el período de 2003-2005. Hubo 7.940 nacidos vivos en el lapso, lo que significa incidencia de 5,18 por ciento. La patología actual predominante fue el trabajo de parto prematuro 32,43 por ciento (131/404). amenaza de parto prematuro 21,79 por ciento (88/404), la rotura prematura de membrana 15,60 por ciento (63/404), hipertensión inducida por el embarazo (10,89 por ciento) (44/404). El 59,65 por ciento son multigestas (241/404), con 59,9 por ciento (242/404) edad de embarazo entre 31 y 36 semanas, y 66,09 por ciento (267/404) parto vaginal. Los neonatos fueron femeninos 50,49 por ciento (208/412), de peso entre 2000 y 2499 g 33,01 por ciento (136/412) y tallas 45-49 cm 37,86 por ciento (156/412); tuvieron {indice Apgar 6 o menos 84,12 por ciento (265/315). La morbilidad global fue 26,45 por ciento (109/412), y la mortalidad perinatal global 40,05 por ciento (165/412), la mortalidad fetal 23,54 por ciento (97/412), mortalidad neonatal 16,5 por ciento (68/412), fue determinante el síndrome de dificultad respiratoria y sepsis. La prmaturez se revela aún con elevadas cifras de morbimortalidad perinatal, aportada principalmente por deficiencias respiratorias y la sepsis. Todo señala a acentuar los programas preventivos y mejorar la atención neonatal. La debemos mantener dentro de nuestras líneas prioritarias de investigación